Visão geral e preparação do acetato de icatibanto

Visão geral

O acetato de icatibanto é um tratamento específico para a doença do angioma hemangioide (AEH) desenvolvido pela Shire, que recebeu aprovação da FDA em 25 de agosto de 2011, para o tratamento de episódios agudos de angioedema hereditário em adultos com 18 anos ou mais. É também o terceiro medicamento aprovado pela FDA para o tratamento de ataques de AEH. O acetato de icatibant possui uma estrutura semelhante a um d-decapeptídeo semelhante à bradicinina, mas contém cinco aminoácidos não derivados de proteínas. Atua como um antagonista competitivo potente e seletivo dos receptores de bradicinina tipo 2 (B2), aliviando o inchaço local, a inflamação e a dor associada aos episódios de AEH, inibindo os efeitos da bradicinina. O AEH representa apenas uma das várias indicações potenciais para as quais o icatibanto pode ser indicado; outras aplicações potenciais incluem asma, cirrose hepática e outros tipos de angioedema. Consequentemente, o acetato de icatibanto apresenta um valor terapêutico significativo e amplas perspectivas de mercado.

Fórmula da estrutura química deAcetato de icatibanto

EessencialIinformação

Nome chinês:醋酸艾替班特

Nome inglês: acetato de icatibanto

ID da empresa：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Snúmero de série：HD-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Mfórmula molecular：C59H89N19O13S

Mpeso molecular：1304.52

Acetato de icatibanto Espectro MS

Rota Sintética

1: Preparação de resina Fmoc-Arg(Pbf)-CTC

Adicione 11,1 g de resina de cloreto de 2-clorotrifenilmetil com uma taxa de substituição de 0,9 mmol/g à coluna de reação em fase sólida, seguida pela adição de resina inchada com DMF por 30 minutos. Adicione 3,50μL de DIPEA a 12,98 g de Fmoc-Arg(Pbf)-OH e ativar por 5 minutos; em seguida, adicione a resina inchada com DMF e deixe a mistura atingir o equilíbrio após 10 minutos. Adicione mais 3,50μL de DIPEA, reagir à temperatura ambiente durante 45 minutos e finalmente selar com metanol durante 20 minutos. Evaporar a mistura de reação, lavar três vezes com DMF, três vezes com DCM e depois contrair três vezes com metanol durante 3 minutos, 5 minutos e 8 minutos, respectivamente, produzindo resina Fmoc-Arg(Pbf)-CTC com uma taxa de substituição medida de 0,5 mmol/g.

2：Acoplamento de FMOC-Oico-OH

Pesar 10 mmol de resina Fmoc-Arg (Pbf)-CTC e adicioná-la a um reator de fase sólida, inchar em DMF por 0,5 h, em seguida, remover a proteção Fmoc duas vezes usando solução DBLK a 20% por 10 min e 5 min, respectivamente; após a lavagem, conjugue-o com Fmoc-Oic-OH. Dissolva 11,73 g de Fmoc-Oic-OH, 4,9 g de HOBt e 6,1 mL de DIC em DCM (uma pequena quantidade de DMF pode ser adicionada para solubilização), ative a mistura em banho de água gelada por 7 min, depois transfira-a para o reator de fase sólida e reaja em temperatura ambiente por 1–2 horas. O ponto final da reação é determinado pelo método da indantrona. Após a conclusão, aspire a mistura de reação, lave com DMF, remova a proteção Fmoc duas vezes usando solução DBLK a 20% por 10 min e 5 min, respectivamente, lave novamente e prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

3：Acoplamento de FMOC-D-Cidade-OH

Dissolva 11,91 g de Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g de HOAt e 11,4 g de HATU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,87 g de DIPEA em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e reaja à temperatura ambiente por 1–2 horas. A conclusão da reação é determinada pelo método indiol. Após a reação, remover a mistura reacional, lavar com DMF e eliminar a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

4：Acoplamento de FMOC-Ser(tBu)-OH

Dissolva 11,49 g de Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g de HOAt e 6,1 mL de DIC em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Após ativação em banho de água gelada por 7 minutos, transferir a mistura para um reator de fase sólida e reagir em temperatura ambiente por 1–2 horas; a conclusão da reação é determinada pelo método indiol. Após a conclusão, remova a mistura de reação, lave com DMF e, em seguida, elimine a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%, seguida de lavagem antes de prosseguir para o acoplamento com o próximo aminoácido.

5：Acoplamento de FMOC-Isso-OH

Dissolva 11,79 g de Fmoc-Thi-OH, 5,00 g de HOBt e 11,37 g de HBTU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,87 g de DIPEA em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e deixe a reação em temperatura ambiente por 1–2 horas. A conclusão da reação é determinada pelo método indiol. Após a reação, remover a mistura reacional, lavar com DMF e eliminar a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

6：Acoplamento de FMOC-Gly-OH

Dissolva 8,91 g de Fmoc-Gly-OH, 5,00 g de HOBt e 9,63 g de TBTU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,63 g de TMP em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e deixe a reação em temperatura ambiente por 1–2 horas. A conclusão da reação é determinada pelo método da indanona. Após a reação, remover a mistura reacional, lavar com DMF e eliminar a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

7：Acoplamento de  FMOC-Hip(tBu)-OH

Dissolva 12,27 g de Fmoc-Hip(tBu)–OH, 5,00 g de HOAt e 9,66 g de TATU em DCM (com pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,63 g de TMP em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e reaja à temperatura ambiente por 1–2 horas. O ponto final da reação é determinado pelo método indiol. Após a conclusão, remova a mistura reacional, lave com DMF e elimine a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

8：Acoplamento de FMOC-Pró-OH

Dissolva 10,11 g de Fmoc-Pro-OH, 5,00 g de HOAt e 11,4 g de HATU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,87 g de DIPEA em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e reaja à temperatura ambiente por 1–2 horas. O ponto final da reação é determinado pelo método indiol. Após a conclusão, remova a mistura reacional, lave com DMF e elimine a proteção Fmoc usando 20% de DBLK. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

9：Acoplamento de FMOC-Arg(Pbf)-OH

Dissolva 19,44 g de Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g de HOAt e 11,4 g de HATU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,87 g de DIPEA em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e reaja à temperatura ambiente por 1–2 horas. A conclusão da reação é determinada pelo método indiol. Após a reação, remover a mistura reacional, lavar com DMF e eliminar a proteção Fmoc usando solução DBLK a 20%. Após a lavagem, prepare-se para o acoplamento com o próximo aminoácido.

10：Acoplamento de FMOC-D-Arg(Pbf)-OH

Dissolva 19,44 g de Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g de HOAt e 11,4 g de HATU em DCM (com uma pequena quantidade de DMF adicionada para solubilização). Adicionar 3,87 g de DIPEA em banho de água gelada e ativar por 7 minutos; em seguida, transfira a mistura para um reator de fase sólida e reaja à temperatura ambiente por 1–2 horas. O ponto final da reação é determinado pelo método da indiolona. Após a conclusão, remova a mistura de reação, lave com DMF e use DBLK a 20% para remover a proteção Fmoc. Lave três vezes com DMF, três vezes com DCM e três vezes com metanol para contração (por 3 min, 5 min e 8 min, respectivamente), seguido de secagem a vácuo para obter resina de acetato de peptídeo etibant.

Cromatograma HPLC de acetato de icatibanto

11：Pirólise de resina de acetato de icatibanto

Prepare 200 mL de reagente de lise contendo 190 mL de ácido trifluoroacético, 6 mL de triisopropilsilano e 4 mL de água e pré-resfrie na geladeira por 30 minutos. Adicione 20,0 g de resina de acetato de peptídeo etibant a um balão de fundo redondo de 500 mL e, em seguida, adicione o reagente de lise preparado de 200 mL à resina enquanto agita sob um banho de gelo e sob fluxo de nitrogênio. Após 30 minutos de reação, retirar o banho de gelo e continuar a reação em temperatura ambiente por 2 horas. Filtre a resina e colete o filtrado. Lavar a resina com uma pequena quantidade de ácido trifluoroacético, filtrar e combinar os filtrados. Adicione gradualmente o filtrado a 20 L de éter gelado; forma-se um precipitado branco. Centrifugar a 3.000 rpm para coletar o precipitado, lavar cinco vezes com éter gelado e secar sob pressão reduzida para obter 10,3 g de peptídeo bruto com pureza de HPLC> 90%.